不同固定液对大鼠耳蜗一氧化氮合酶表达及透射电镜观察的影响

The Effects of Different Fixative on Transmission Electron Microscopy Examination and Induced Nitric Oxide Synthase Expression in Rat

陈小婉;江英;仇志强;张小兵;

1:兰州大学第一医院耳鼻咽喉-头颈外科

2:兰州大学

摘要
目的探寻用于观察大鼠耳蜗诱生型一氧化氮合酶(induced nitric oxide synthase,iNOS)表达及透射电镜检查最适合的固定液配比,简化实验手段。方法将正常大鼠6只(12耳,正常组)和庆大霉素耳中毒模型大鼠6只(12耳,模型组)各分为A、B两组(每组各3只,6耳),A组给予2.5%多聚甲醛-2.5%戊二醛、B组给予4%多聚甲醛-0.5%戊二醛混合液心内灌注耳蜗固定处死,然后进行耳蜗免疫组化染色及透射电镜观察,比较两组耳蜗的染色和电镜固定效果。结果正常组与模型组大鼠的耳蜗外毛细胞、螺旋神经节等均有iNOS阳性表达;但正常组及模型组的A组耳蜗组织免疫组化染色有轻度溶解,背景染色不佳,B组耳蜗组织细胞染色清晰,对比度及透明度好,背景无明显着色。正常组及模型组中A、B两组电镜下耳蜗细胞器等微结构清晰。结论 4%多聚甲醛-0.5%戊二醛混合液心内灌注的方法既能较好地固定大鼠耳蜗细胞器的结构,也能较好的保留iNOS抗原。
关键词
大鼠;诱生型一氧化氮合酶;透射电镜;固定液;庆大霉素
基金项目(Foundation):
兰州大学第一医院青年基金资助(ldyyynqn201005)
作者
陈小婉;江英;仇志强;张小兵;
参考文献

1 Shi L,An Y,Wang A,et al.The protective effect of Salvia miltiorrhiza on gentamicin-induced ototoxicity[J].Am J Otolaryngol,2014,35:171.

2 Liu HY,Chi FL,Gao WY.Taurine attenuates aminoglycoside ototoxicity by inhibiting inducible nitric oxide synthase expression in the cochlea[J].Neuroreport,2008,19:117.

3 张文丽,李倩,郭静,等.未脱钙耳蜗组织树脂包埋与切片方法[J].临床与实验病理学杂志,2013,29:1142.

4 胡吟燕,孙建和,汪学勇,等.耳蜗组织低温包埋切片技术[J].听力学及言语疾病杂志,2005,13:378.

5 张亚,邹静,Pyykko I,等.线粒体毒素诱导伴有眩晕的突发性耳聋模型的建立[J].上海交通大学学报,2007,27:14.

6 谢鼎华,郭运凯,伍伟景,等.庆大霉素对内侧橄榄耳蜗传出神经毒性作用的形态学观察[J].中华耳鼻咽喉科杂志,1999,34:157.

7 穆恩,姜学钧,杨宁,等.ATP对细菌内毒素引起的大鼠耳蜗iNOS表达的影响[J].中国医科大学学报,2004,33:314.

8 周晶,戴春富.一氧化氮合酶抑制剂对大鼠耳蜗诱生型一氧化氮合酶mRNA表达的影响[J].中国眼耳鼻喉科杂志,2008,8:151.

9 王爱梅,汤浩,沈静,等.丹参注射液对庆大霉素耳中毒豚鼠耳蜗血管纹NOS活性的影响[J].中国应用生理学杂,2001,30:85.

10 石丽娟,官捷,汤浩,等.链霉素耳中毒豚鼠耳蜗螺旋神经节iNOS、Ache表达及丹参的保护作用[J].中国应用生理学杂志,2009,25:264.

11 沈静,汤浩,章晓芳,等.诱生型一氧化氮合酶在正常豚鼠耳蜗内的分布[J].中国医科大学学报,2000,29:180.

12 Yamamoto H,Omelchenko I,Shi X,et al.The influence of NF-kappaB signal-transduction pathways on the murine inner ear by acoustic overstimulation[J].J Neurosci Res,2009,87:1832.

13 付兴华,邓艳丽,卢鹤翔,等.弥漫性脑损伤后SD大鼠内耳HO-1、iNOS蛋白与mRNA的表达[J].中国煤炭工业医学杂志,2012,15:1407.