首页 > 过刊浏览 > 文章详情

质膜钙ATP酶异构体1~3在新生大鼠耳蜗基底膜的表达

The Expression of Plasma Membrane Ca2+-ATPase Isoforms 1~3in the Basilar Membrane of Neonatal Rat Cochlea

陈请国;褚汉启;周良强;陈金;刘云;罗蜜;陶雁玲;

1:华中科技大学同济医学院附属同济医院耳鼻咽喉-头颈外科

2:湖北文理学院附属襄阳市中心医院耳鼻咽喉-头颈外科

在线阅读

摘要

目的通过Western blot方法检测质膜钙ATP酶异构体13(plasma membrane Ca2+-ATPase isoforms 13(plasma membrane Ca2+-ATPase isoforms 13,PMCA13,PMCA13)在新生大鼠耳蜗基底膜(basilar membrane,BM)的表达,并检测PMCA2在单个新生大鼠耳蜗毛细胞纤毛的表达量。方法 1取出生后2天(P2)和8天(P8)健康SD大鼠各4只,断头后分离出BM,提取总蛋白,分别取20μg,通过Western blot法检测BM的PMCA13)在新生大鼠耳蜗基底膜(basilar membrane,BM)的表达,并检测PMCA2在单个新生大鼠耳蜗毛细胞纤毛的表达量。方法 1取出生后2天(P2)和8天(P8)健康SD大鼠各4只,断头后分离出BM,提取总蛋白,分别取20μg,通过Western blot法检测BM的PMCA13表达。2取P2和P8大鼠BM总蛋白3μg,通过Western blot方法检测BM的PMCA2的表达。3取4只P8大鼠,分离出BM,提取总蛋白,分别取5、10、20μg总蛋白并取100、400和800ng牛血清白蛋白(BSA)作为对照组,跑完电泳后将胶分为2部分,部分泳道用于SYPRO染胶,其余泳道用于Western blot检测PMCA2的表达。结果 1在20μg的P2和P8大鼠BM总蛋白中,PMCA1仅有微弱的表达(分别为0.126±0.024、0.131±0.012),PMCA2表达水平较高(分别为4.16±0.528、4.25±0.319),PMCA3几乎没有表达(均为0),三者间差异有统计学意义(P<0.05)。2在3μg的P2和P8大鼠BM总蛋白中,P8大鼠PMCA2的表达水平(4.571±0.336)高于P2大鼠(3.622±0.285),差异有统计学意义(P<0.05)。3PMCA2在单个P8大鼠BM的含量约为2.5ng。结论 PMCA13表达。2取P2和P8大鼠BM总蛋白3μg,通过Western blot方法检测BM的PMCA2的表达。3取4只P8大鼠,分离出BM,提取总蛋白,分别取5、10、20μg总蛋白并取100、400和800ng牛血清白蛋白(BSA)作为对照组,跑完电泳后将胶分为2部分,部分泳道用于SYPRO染胶,其余泳道用于Western blot检测PMCA2的表达。结果 1在20μg的P2和P8大鼠BM总蛋白中,PMCA1仅有微弱的表达(分别为0.126±0.024、0.131±0.012),PMCA2表达水平较高(分别为4.16±0.528、4.25±0.319),PMCA3几乎没有表达(均为0),三者间差异有统计学意义(P<0.05)。2在3μg的P2和P8大鼠BM总蛋白中,P8大鼠PMCA2的表达水平(4.571±0.336)高于P2大鼠(3.622±0.285),差异有统计学意义(P<0.05)。3PMCA2在单个P8大鼠BM的含量约为2.5ng。结论 PMCA13在新生大鼠耳蜗BM的表达水平不同,PMCA2表达量最大,这可能是由于耳蜗毛细胞对这几种PMCA亚型有不同的Ca2+调节需求。

关键词

质膜钙ATP酶异构体1;质膜钙ATP酶异构体2;质膜钙ATP酶异构体3;基底膜;耳蜗

基金项目(Foundation):

国家自然科学基金青年基金(81300827)资助

作者

陈请国;褚汉启;周良强;陈金;刘云;罗蜜;陶雁玲;

参考文献

1 Keeton TP,Burk SE,Shull GE.Alternative splicing of exons encoding the calmodulin-binding domains and C termini of plasma membrane Ca2+-ATPase isoforms 1,2,3,and 4[J].J Biol Chem,1993,268:2740.

2 Dumont RA,Lins U,Filoteo AG,et al.Plasma membrane Ca2+-ATPase isoform 2ais the PMCA of hair bundles[J].J Neurosci,2001,21:5066.

3 Crouch JJ,Schulte BA.Expression of plasma membrane CaATPase in the adult and developing gerbil cochlea[J].Hear Res,1995,92:112.

4 陈请国,褚汉启,王显红,等.质膜钙ATP酶异构体2在新生大鼠螺旋神经节细胞中的表达[J].中华耳鼻咽喉头颈外科杂志,2010,45:128.

5 Chen QG,Mahendrasingam S,Tickle JA,et al.The development,distribution and density of the plasma membrane calcium ATPase 2calcium pump in rat cochlear hair cells[J].Eur J Neurosci,2012,36:2302.

6 Jacobs RA,Hudspeth AJ.Ultrastructural correlates of mechanoelectrical transduction in hair cells of the bullfrog's internal ear[J].Cold Spring Harb Symp Quant Biol,1990,55:547.

7 Street VA,McKee-Johnson JW,Fonseca RC,et al.Mutations in a plasma membrane Ca2+-ATPase gene cause deafness in deafwaddler mice[J].Nat Genet,1998,19:390.

8 Wood JD,Muchinsky SJ,Filoteo AG,et al.Low endolymph calcium concentrations in deafwaddler 2J mice suggest that PMCA2contributes to endolymph calcium maintenance[J].J Assoc Res Otolaryngol,2004,5:99.

9 Ricci AJ,Crawford AC,Fettiplace R.Tonotopic variation in the conductance of the hair cell mechanotransducer channel[J].Neuron,2003,40:983.

10 Lelli A,Asai Y,Forge A,et al.Tonotopic gradient in the developmental acquisition of sensory transduction in outer hair cells of the mouse cochlea[J].J Neurophysiol,2009,101:2961.

11 Si F,Brodie H,Gillespie PG,et al.Developmental assembly of transduction apparatus in chick basilar papilla[J].J Neurosci,2003,23:10815.

12 Beurg M,Nam JH,Chen QG,et al.Calcium balance and mechanotransduction in rat cochlear hair cells[J].J Neurophysiol,2010,104:18.

13 Lumpkin EA,Hudspeth AJ.Regulation of free Ca2+concentration in hair-cell stereocilia[J].J Neurosci,1998,18:6300.

14 Yamoah EN,Lumpkin EA,Dumont RA,et al.Plasma membrane Ca2+-ATPase extrudes Ca2+from hair cell stereocilia[J].J Neurosci,1998,18:610.

本文信息

PDF(177K)

本文作者相关文章

陈请国褚汉启周良强陈金刘云罗蜜陶雁玲