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GJB2基因条件敲除小鼠的繁殖、基因型鉴定及听力检测

Breeding,Genotyping and Hearing Examination of the GJB2 Conditional Knock Out Mice

万亚蕊;张延平;张晓强;杨仕明;

1:解放军总医院耳鼻咽喉头颈外科

2:解放军第309医院耳鼻喉科

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摘要

目的探讨GJB2基因条件敲除(conditional connexin 26knock out,cCx26KO)小鼠的饲养、繁殖及基因型鉴定方法,为进一步研究GJB2基因突变导致非综合征型聋的机制奠定基础。方法将引进的两对转基因小鼠Cx26loxp/loxp和Pax2-Cre/+进行交配饲养与繁殖,选取子一代雌性Cx26loxp/-_Pax2-Cre/+小鼠与雄性小鼠Cx26loxp/loxp合笼交配,即获得cCx26KO小鼠。提取鼠尾组织基因组DNA,PCR方法鉴定动物基因型。采用c-ABR检测成年cCx26KO小鼠和野生型小鼠的听力,进一步验证PCR方法的正确性。结果 cCx26KO小鼠繁殖成功后,采用PCR方法鉴定分析,成功获得Cx26loxp/loxp_Pax2Cre/+、Cx26loxp/-_Pax2-Cre/+、Cx26loxp/loxp、Cx26loxp/-4种基因型小鼠,其繁殖结果符合孟德尔遗传定律。与野生型小鼠相比,cCx26KO小鼠c-ABR反应阈显著升高,约达95dB SPL。结论 PCR方法可准确鉴定子鼠的基因型,雌性Cx26loxp/-_Pax2-Cre/+小鼠与雄性Cx26loxp/loxp小鼠交配是获得cCx26KO实验小鼠的有效途径。

关键词

GJB2基因;小鼠;基因敲除;野生型;基因型鉴定;感音神经性聋

基金项目(Foundation):

全军十二五面上项目(11MS013);; 国家自然科学基金面上项目青年基金(30700936),国家自然科学基金重点项目(30730040)联合资助;; 中国人民解放军第309医院院内基金(LCB08MS12、309-09-03);; 国家973计划重大科学研究计划干细胞项目(2012CB967900);; 国家973计划重大科学问题导向项目(2011CBA01000);; 国家863计划专题项目(2007AA02Z150)

作者

万亚蕊;张延平;张晓强;杨仕明;

参考文献

1 Dai P,Yu F,Han B,et al.GJB2mutation spectrum in 2063Chinese patients with nonsyndromic hearing impairment[J].JTransl Med,2009,7:1.

2 韩明昱,戴朴.我国耳聋基因诊断的临床应用进展[J].北京医学,2011,33:419.

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5 郝海邦,杨承忠,岳碧松.条件性基因敲除:骨髓细胞特异性敲除Ncol2基因小鼠的建立和基因型鉴定[J].四川动物,2011,30 :961.

6 Cohen-Salmon M,Ott T,Michel V,et al.Targeted ablationof connexin26in the inner ear epithelial gap junction networkcauses hearing impairment and cell death[J].Curr Biol,2002,12 :1 106.

7 Zhang YP,Zhang X,Sun Y,et al.Apoptosis progression inthe hair cells in the organ of corti of GJB2conditional knockoutmice[J].Clinical and Experimental Otorhinolaryngology,2012,5:1.

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