纯中药制剂复聪汤对庆大霉素致聋豚鼠耳蜗毛细胞修复再生的实验研究

The Experment Study of Cochlear Hair Cells Regeneration and Recovery after Ototoxic Gentamicin Induced Damage Using Chinese Traditional Medicine Fucong Durg Treatment on Guinea Pig

李胜利;朱宏亮;刘全征;王玮;刘琦;史士合;刘艳平;王福田;李宪德;

1:西安交通大学医学院第二附属医院科研实验中心

2:西安交通大学医学院神经科学研究中心

3:山东菏泽康乐普外医院

摘要
目的观察纯中药制剂对庆大霉素致聋动物和耳蜗毛细胞的修复再生作用。方法选用73只健康青年豚鼠,行听力学检查后,53只动物连续肌肉注射庆大霉素(80mg.kg-1.d-1)24~30天致聋(GM组),其间死亡8只,剩余45只随机分成中药治疗组(25只)和致聋后对照组(20只),中药治疗组给予纯中药制剂"复聪汤Ⅰ号"口服液和"复聪汤Ⅱ号"滴耳液治疗,致聋后对照组同法给予生理盐水。另外20只豚鼠作为正常对照组,每天肌肉注射等量生理盐水。在治疗30、60和90天后对GM组两组动物分别行ABR、DPOAE检测,同时,每一时间点处死6只动物,左侧耳蜗行扫描电镜观察,右侧耳蜗铺片行光镜观察和毛细胞计数。结果实验前所有豚鼠的听功能正常;连续注射庆大霉素30天后,GM组豚鼠ABR反应阈值上升到50~80dB SPL,DPOAE幅值降低,光镜和电镜下表现为耳蜗毛细胞纤毛断碎、倒伏、融合和消失,多处毛细胞表皮板肿胀、突起和疱疹样变性,或毛细胞被完全挤出网状板,基底回和第三回耳蜗毛细胞严重消失;中药治疗30天后,80%的耳聋豚鼠的ABR反应阈恢复到30~50dB SPL,DPOAE幅值明显提高;耳蜗铺片和电镜观察显示耳蜗毛细胞数目有一定恢复,组织结构有修复现象,扫描电镜可见再生毛细胞仅出现少量纤毛,而致聋后对照组未发现此种现象;治疗60天后,耳蜗毛细胞数目明显增多,Corti器的毛细胞区有大量的增殖细胞出现,扫描电镜可见成小束的新生纤毛出现在毛细胞缺失部位,同时支持细胞大量增殖;治疗90天后,再生的静纤毛束已基本形成,尤其是耳蜗基底部位的毛细胞明显增多,听功能基本正常。结论纯中药制剂复聪汤对庆大霉素致聋豚鼠耳蜗毛细胞有一定的修复和再生作用。
关键词
中药;耳蜗;毛细胞;再生;豚鼠
基金项目(Foundation):
国家自然科学基金(No,81170922)和横向研究课题资助
作者
李胜利;朱宏亮;刘全征;王玮;刘琦;史士合;刘艳平;王福田;李宪德;
参考文献

1倪月秋,汤浩,崔城.庆大霉素中毒后豚鼠耳蜗毛细胞的再生[J].中国病理生理杂志,2004,20:536.

2刘冰,李西秦,吴润身,等.庆大霉素耳中毒后豚鼠椭圆囊斑和耳蜗毛细胞损伤与再生的观察[J].中华耳鼻咽喉科杂志,1998,33:184.

3沈啸洪,林文森.补肾聪耳片对卡那霉素致聋豚鼠听毛细胞修复研究[J].天津医药,2004,32:38.

4候建平,刘耀春,刘桂英.茯苓与豚鼠卡那霉素耳中毒[J].中医药研究,1997,13:45.

5倪月秋.中药对氨基糖苷类抗生素致聋耳蜗毛细胞再生修复影响的研究进展[J].沈阳医学院学报,2010,12:193.

6崔城,汤浩,李煜兴,等.川芎嗪对庆大霉素耳中毒耳蜗外毛细胞和血管纹的保护作用[J].听力学及言语疾病杂志,2002,10:258.

7徐绍勤,殴阳林,曾省三,等.复聪片对豚鼠庆大霉素耳中毒的防治作用[J].中药新药与临床药理,1999,10:341.

8钟渠,郑桃晓,冯志荣,等.聪耳合剂治疗感音神经性耳聋随机对照研究[J].中华中医药学刊,2011,29:1 752.

9陈奇,主编.中药药理研究方法学[M].第二版.北京:人民卫生出版社,1993.1 167~1 170.

10李胜利,朱宏亮,白秦生.庆大霉素和卡那霉素耳中毒后雏鸡耳蜗毛细胞再生[J].中华耳鼻咽喉科杂志,1997,29:89.

11李胜利,朱宏亮,白秦生.氨基糖甙类抗生素损害鸡耳蜗后前庭毛细胞再生及耳石体修复[J].临床耳鼻咽喉科杂志,1994,8:102.

12李胜利,张正民,张少强,等.蝙蝠耳蜗毛细胞损害后支持细胞转分化为再生毛细胞研究[J].中华耳科学杂志,2010,8:335.

13 Baird RA,Burton MD,Fashena DS,et al.Hair cell recovery in mitotically blocked cultures of the bullfrog saccule[J].Proceedings of the National Academy of Sciences of the Unit-ed States of America,2000,97:11 722.

14 Steyger PS,Burton M,Hawkins JR,et al.Calbindin and parvalbumin are early markers of non-mitotically regenera-ting hair cells in the bullfrog vestibular otolith organs[J].Int J Dev Neurosci,1997,15:417.

15 Hirose K,Westrum LE,Stone JS,et al.Dynamic studies of ototoxicity in mature avian auditory epithelium[J].Annals of the New York Academy of Sciences,1999,884:389.

16 Li L,Forge A.Morphological evidence for supporting cell to hair cell conversion in the mammalian utricular macula[J].Int J Dev Neurosci,1997,15:433.

17 Stone JS,Rubel EW.Cellular studies of auditory hair cell re-generation in birds[J].Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America,2000a,97:11714.

18 Daudet N,Vago P,Ripoll C,et al.Characterizaton of atypi-cal cells in the juvenile rat organ of corti after aminoglycoside ototoxity[J].The Journal of Comparative Neurology,1998,401:145.

19 Cafaro J,Lee GS,Stone JS.Atoh1expression defines activa-ted progenitors and differentiating hair cells during avian hair cell regeneration[J].Dev Dyn,2007,236:156.

20李胜利,朱宏亮.庆大霉素耳中毒后毛细胞再生的超微结构和功能恢复[J].西安医科大学学报,1997,18:381.