76例听神经病患者OTOF基因突变分析

Analysis of OTOF Gene Mutations in 76 Cases of Auditory Neuropathy

王大勇;王秋菊;兰兰;赵亚丽;丁海娜;纵亮;韩东一;

1:解放军总医院耳鼻咽喉-头颈外科解放军耳鼻咽喉科研究所

2:解放军总医院耳鼻咽喉-头颈外科解放军耳鼻咽喉科研究所

3:解放军总医院耳鼻咽喉-头颈外科解放军耳鼻咽喉科研究所

4:解放军总医院耳鼻咽喉-头颈外科解放军耳鼻咽喉科研究所

摘要
目的对散发听神经病患者进行OTOF基因突变筛查,了解中国听神经病患者中是否存在该基因的热点突变位点。方法选取解放军总医院门诊2003~2005年确诊的散发听神经病患者76例,采集患者外周静脉血,提取基因组DNA;选取OTOF基因已经报道的存在突变或位于突变附近的9个外显子,应用Primer5软件设计9对引物,采取聚合酶链式反应(PCR)扩增,应用PCR产物直接测序法进行OTOF基因突变检测;使用DNAStar软件进行测序序列的对比分析。结果本研究共发现了OTOF基因的8种多态位点。1名温度敏感性听神经病患者检测到82769delAG缺失突变,位于OTOF基因第25外显子上的AG缺失突变导致氨基酸在993位发生改变,翻译截止于1000位氨基酸处,该患者并未检测到OTOF基因的其他突变。56842A/C、82885C/A、92905G/A为已知多态位位点,其中56842A/C和92905G/A多态在NCBI显示的不同人群的多态频率与本研究的多态频率无差异。2例患者发现76378C/T杂合突变(突变率2.63%)、3例患者发现82913G/A杂合突变(突变率3.95%),这两种突变分别位于第15内含子和第25内含子,考虑为本研究发现的新的单核苷酸多态。11例患者发现92995C/T杂合突变(突变率14.47%),5例患者发现96888C/T杂合突变(突变率6.58%),这两种突变分别位于第39外显子和第44外显子,但均没有引起氨基酸的改变。结论本研究在散发听神经病患者中发现了8种OTOF基因多态位点,并未发现国外报道的已知突变,这意味着中国听神经病患者可能存在OTOF基因新的突变,或者存在其它相关致病基因。
关键词
听神经病;OTOF基因;突变;温度敏感
基金项目(Foundation):
国家863项目(2006AA02Z181);; 国家自然科学基金面上项目(30470956,30572016&30672310);; 高等学校全国优秀博士学位论文作者专项资金资助项目(200463);; 军队“十一五”杰出人才项目(06J018);; 北京市科技计划重大项目(D0906005040291);; 国家973项目(2007CB507400);; 北京市重大专项课题项目(7070002);; 国家“十一五”科技支撑计划(2006BAI02B06&2007BAI18B12)
作者
王大勇;王秋菊;兰兰;赵亚丽;丁海娜;纵亮;韩东一;
参考文献

1Starr A,Picton TW,Sininger Y,et al.Auditory neuropathy[J].Brain,1996,119:741.

2Yasunaga S,Grati M,Petit C,et al.A mutation in OTOF,encoding otoferlin,a FER-1-like protein,causes DFNB9,a nonsyndromic form of deafness[J].Nature Genet,1999,21:363,

3Yasunaga S,Grati M,Petit C,et al.OTOF encodes multiple long and short isoforms:genetic evidence that the long ones underlie recessive deafness DFNB9[J].Am J Hum Genet,2000,67:591.

4Adato A,Raskin L,Petit C,et al.Deafness heterogeneity in a Druze isolate fromthe Middle East:novel OTOF and PDS mutations,low prevalence of GJB235del G mutation and indi-cation for a new DFNBlocus[J].Europ J Hum Genet,2000,8:437.

5Migliosi V,Modamio-Hoybjor S,Moreno-Pelayo MA,et al.Q829X,a novel mutation in the gene encoding otoferlin(OTOF),is frequently found in Spanish patients with prelin-gual non-syndromic hearingloss[J].J Med Genet,2002,39:502.

6Varga R,Kelley PM,Keats BJ,et al.Non-syndromic reces-sive auditory neuropathy is the result of mutations in the oto-ferlin(OTOF)gene[J].J Med Genet,2003,40:45.

7Tekin M,Akcayoz D,Incesulu A.Anovel missense mutation in a C2domain of OTOFresults in autosomal recessive audito-ry neuropathy[J].AmJ Med Genet,2005,138A:6.

8Varga R,Avenarius MR,Kelley PM,et al.OTOF mutations revealed by genetic analysis of hearingloss families including a potential temperature sensitive auditory neuropathy allele[J].J Med Genet,2006,43:576.

9Roux I,Safieddine S,Petit1C,et al.Otoferlin,defective in a human deafness form,is essential for exocytosis at the audito-ry ribbon synapse[J].Cell,2006,08:40.

10Wang Qj,Li R,Zhao H,et al.Clinical and molecular charac-terization of a Chinese patient with auditory neuropathy associ-ated mitochondrial12S rRNA T1095C mutation[J].J Med Genet,2005,133A:27.

11Wang QJ,Li QZ,Rao SQ,et al.AUNX1,a novel locus re-sponsible for X linked recessive auditory and peripheral neu-ropathy,maps to Xq23-27.3[J].J Med Genet,2006,43:33.

12王秋菊,李庆忠,刘穹,等:遗传性听神经病的基因定位及候选基因筛查研究[J].中华耳科学杂志,2005,3:245.