大鼠听泡原代成骨细胞分离培养及鉴定

The Primary Osteoblasts Isolation, Culturing and Identification in Rat Otocyst

黄玉;刘豆;黄文霞;梁耕田

1:武汉大学附属同仁医院(武汉市第三医院)耳鼻咽喉-头颈外科

摘要

目的对SD大鼠听泡的原代成骨细胞进行分离培养及鉴定。方法选取6只出生24 h的SD乳鼠，从颞区无菌分离出听泡组织，经0.25%胰蛋白酶和I型胶原酶消化后接种培养；待生长融合至80%密度时，进行传代培养，于倒置显微镜下观察原代及传代成骨细胞的生长状态，并用EDU法分析其增殖趋势。对生长良好的细胞进行成骨诱导分化，并用ALP试剂盒和茜素红试剂盒进行染色分析，鉴定分化效果。结果大鼠听泡原代及传代成骨细胞培养中，细胞均贴壁良好、生长旺盛，第2 d分别可融合生长至50%、30%的密度，第4 d分别可融合生长至80%、70%的密度，形态呈现多样化。EDU法检测分析见：第1～4 d细胞增殖比均维持在较高水平，从第5 d起呈直线下降趋势。经诱导分化后，细胞生长状态良好，形态依旧多样化，早期以梭形为主，中后期形态较为丰腴。分化后2周，ALP染色见大量细胞胞质呈现深蓝色；第15 d经茜素红染色便可见局部出现橙红色钙化结节。结论通过胰酶联合胶原酶两步消化法，成功地从SD乳鼠听泡中分离出原代成骨细胞，所得细胞生长及传代能力强，经诱导分化后具备良好的成骨活性，为鼓室硬化等疾病的体外研究提供可能。

关键词

大鼠;听泡;成骨细胞;鼓室硬化

基金项目(Foundation):

武汉市科技局知识创新专项曙光计划(2022020801020554);; 武汉市卫健委青年项目(WX21Q24);武汉市卫健委面上项目(WX21A10);武汉市卫健委面上项目(WX18C05)

作者

黄玉;刘豆;黄文霞;梁耕田

参考文献

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