氯化锂通过JNK信号通路诱导HEI-OC1毛细胞样细胞的凋亡

Lithium Chloride Induce the Apoptosis of HEI-OC1 Cells via the JNK Signaling Pathway

孙宇轩;唐晓敏;徐晨宇;郭小涛;赵轶;梁越;潘春晨;孙家强;孙敬武;

1:安徽医科大学附属省立医院耳鼻咽喉头颈外科

摘要

目的探讨氯化锂对HEI-OC1毛细胞样细胞的毒性作用及可能作用机制。方法首先采用CCK-8试剂盒检测0、25、50、75、100、125、150 mM氯化锂浓度处理12、24、48、72小时对HEI-OC1毛细胞样细胞的抑制作用,计算出IC_(50)的浓度值。然后将对数生长期的HEI-OC1毛细胞样细胞分为对照组(不进行任何干预)和实验组(IC_(50)浓度处理24小时)、DMSO组(溶剂组)和JNK抑制组(这两组仅进行Western blot实验以验证氯化锂是否通过JNK信号通路诱导细胞凋亡);采用TUNEL法和流式细胞术检测对照组和实验组细胞的凋亡率,采用RT-PCR检测Caspase-3、Caspase-9、JNK、BAX、Bcl-2的mRNA的表达,使用Western blot检测Cleaved-Caspase-3、Cleaved-Caspase-9、JNK、p-JNK、BAX、Bcl-2蛋白的表达。结果与对照组相比,随着氯化锂浓度和处理时间增加,氯化锂对HEI-OC1毛细胞样细胞的抑制率逐渐增高(P<0.01),拟合出氯化锂在24小时的IC_(50)值为69.53 mM,故实验组氯化锂处理浓度取70 mM。TUNEL法显示实验组凋亡率(36.00%±2.65%)较对照组(2.33%±0.58%)明显提高(t=21.53,P<0.01);流式细胞术检测结果显示,与对照组(0.42%±0.02%)相比,实验组凋亡率(42.40%±0.82%)明显上升(t=88.33,P<0.01)。RT-PCR实验结果表明,与对照组相比,实验组Caspase-3、Caspase-9、JNK、BAX mRNA表达增加,Bcl-2 mRNA表达减少(均为P<0.01)。Western blot实验结果表明,与对照组相比,实验组Cleaved-Caspase-3、Cleaved-Caspase-9、p-JNK、BAX蛋白表达增加,Bcl-2、Bcl-2/BAX蛋白表达减少(均为P<0.01);与实验组相比,JNK抑制组Cleaved-Caspase-3、Cleaved-Caspase-9、p-JNK、BAX蛋白表达减少,Bcl-2、Bcl-2/BAX蛋白表达增加(均为P<0.01)。结论氯化锂通过JNK信号通路诱导HEI-OC1毛细胞样细胞的凋亡。

关键词

氯化锂;HEI-OC1毛细胞样细胞;凋亡;JNK

基金项目(Foundation):

国家自然科学基金(81470699,81600793,81800911);; 安徽省自然科学基金(18085QH248);; 中国科学技术大学新医学联合基金(WK9110000053)

作者

孙宇轩;唐晓敏;徐晨宇;郭小涛;赵轶;梁越;潘春晨;孙家强;孙敬武;

参考文献

[1] Licht RW.Lithium:still a major option in the management of bipolar disorder[J].CNS Neurosci Ther,2012,18(3):219-226．

[2] Shah SM,Patel CH,Feng AS,et al.Lithium alters the morphology of neurites regenerating from cultured adult spiral ganglion neurons[J].Hear Res,2013,304(10):137-144．

[3] McKnight RF,Adida M,Budge K,et al.Lithium toxicity profile:a systematic review and meta-analysis[J].Lancet,2012,9817(379):721-728．

[4] Plenge U,Moller AM.Development of sustained vasodilatory shock and permanent loss of hearing after severe lithium carbonate poisoning[J].Ugeskr Laeger,2008,170(5):354-356．

[5] Han SR,Shin C,Park S,et al.Differential expression of activating transcription factor-2and c-Jun in the immature and adult rat hippocampus following Lithium-Pilocarpine induced status epilepticus[J].Yonsei Medical Journal,2009,50(2):200-205．

[6] Li L,Song H,Zhong L,et al.Lithium chloride promotes apoptosis in human leukemia NB4cells by inhibiting glycogen synthase kinase-3beta[J].International Journal of Medical Sciences,2015,12(10):805-810．

[7] Gong R,Wang P,Dworkin L.What we need to know about the effect of lithium on the kidney[J].Am J Physiol Renal Physiol,2016,311(6):1168-1171．

[8] Yao R,Sun X,Xie Y,et al.Lithium chloride inhibits cell survival,overcomes drug resistance,and triggers apoptosis in multiple myeloma via activation of the Wnt/β-catenin pathway[J].American Journal of Translational Research,2018,10(8):2610-2618．

[9] Dhanasekaran DN,Reddy EP.JNK signaling in apoptosis[J].Oncogene,2008,48(27):6245-6251．

[10] Dhanasekaran DN,Reddy EP.JNK-signaling:a multiplexing hub in programmed cell death[J].Genes&Cancer,2017,8(9-10):682-694．

[11] Lu Z,Miao Y,Muhammad I,et al.Colistin-induced autophagy and apoptosis involves the JNK-Bcl2-Bax signaling pathway and JNK-p53-ROS positive feedback loop in PC-12cells[J].Chem Biol Interact,2017,277(17):62-73.

本文信息

PDF(1309K)

本文关键词相关文章

氯化锂 HEI-OC1毛细胞样细胞凋亡 JNK

本文作者相关文章

孙宇轩唐晓敏徐晨宇郭小涛赵轶梁越潘春晨孙家强孙敬武